Paano mo ilalagay ang isang gene sa isang plasmid?

2024 May -akda: Stanley Ellington | [email protected]. Huling binago: 2024-01-18 08:23

Ang mga pangunahing hakbang ay:

1. Putulin buksan ang plasmid at "idikit" sa gene . Ang prosesong ito ay umaasa sa mga restriction enzymes (na pumuputol sa DNA) at DNA ligase (na sumasali sa DNA).
2. Ipasok ang plasmid sa bakterya
3. Lumaki ng marami plasmid -nagdadala ng bacteria at ginagamit ang mga ito bilang "pabrika" para gawin ang protina.

Gayundin, paano maipasok ang isang gene sa isang plasmid GCSE?

ito ay ipinasok sa isang plasmid gamit ang ligase enzymes. ang plasmid pupunta sa isang bacterial cell. ang transgenic bacterium ay nagpaparami, na nagreresulta sa milyon-milyong magkakahawig na bakterya na gumagawa ng insulin ng tao.

Bukod pa rito, paano mo i-subclone ang isang gene? Pangunahing Hakbang para sa Subcloning Ilalabas at linisin mo ang iyong insert mula sa parent vector, i-ligate ang insert na ito sa isang inihandang destination vector, ibahin ang ligation reaction na ito sa mga karampatang bacterial cell. Pagkatapos ay i-screen mo ang mga nabagong cell para sa insert.

Kung isasaalang-alang ito, ano ang 4 na hakbang ng pag-clone ng gene?

Sa classical restriction enzyme digestion at ligation cloning protocols, ang pag-clone ng anumang fragment ng DNA ay mahalagang nagsasangkot ng apat na hakbang:

• paghihiwalay ng DNA ng interes (o target na DNA),
• ligation,
• paglipat (o pagbabago), at.
• isang pamamaraan ng screening/pagpili.

Paano mo pinapalaki ang isang plasmid?

Eksperimental na Pamamaraan

1. Patakbuhin ang PCR at linisin ang produkto ng PCR: Patakbuhin ang PCR upang palakasin ang iyong insert DNA.
2. Digest ang iyong DNA:
3. Ihiwalay ang iyong insert at vector sa pamamagitan ng gel purification:
4. Ligate ang iyong insert sa iyong vector:
5. Pagbabago:
6. Ihiwalay ang Tapos na Plasmid:
7. I-verify ang iyong Plasmid sa pamamagitan ng Sequencing: