Ano ang mangyayari kung nagdagdag ka ng masyadong maraming restriction enzyme?
Ano ang mangyayari kung nagdagdag ka ng masyadong maraming restriction enzyme?

Video: Ano ang mangyayari kung nagdagdag ka ng masyadong maraming restriction enzyme?

Video: Ano ang mangyayari kung nagdagdag ka ng masyadong maraming restriction enzyme?
Video: BEST SUNSET RESTAURANT in Kandy Sri Lanka ๐Ÿ‡ฑ๐Ÿ‡ฐ 2024, Nobyembre
Anonim

Maaaring mangyari ang hindi kumpletong panunaw kapag sobra o masyadong maliit enzyme Ginagamit. Ang pagkakaroon ng mga kontaminant sa ang sample ng DNA pwede pagbawalan ang mga enzyme , na nagreresulta din sa hindi kumpletong panunaw. Ang ilan mga enzyme ng paghihigpit nangangailangan ng mga cofactor para sa buong aktibidad.

Bukod, bakit huling idinagdag ang mga restriction enzymes?

Ang paghihigpit na enzyme ay karaniwang ang huli sangkap idinagdag sa isang reaksyon upang matiyak na hindi ito nalantad sa matinding mga kondisyon. Ang pinagsama-samang reaksyon ay dapat na halo-halong pagkatapos enzyme karagdagan. Paghaluin ang lahat ng mga solusyon na naglalaman mga enzyme ng paghihigpit malumanay na umiwas enzyme inactivation.

Higit pa rito, paano mapapabuti ang paghihigpit sa panunaw ng enzyme? Gumamit ng hindi hihigit sa inirerekomenda enzyme halaga (hal., 10 unit ng enzyme bawat microgram ng DNA). Bawasan ang dami ng enzyme sa reaksyon, kung kinakailangan. Iwasan ang matagal na pagpapapisa ng itlog pantunaw reaksyon. Gamitin ang inirerekomendang buffer ng reaksyon.

Alamin din, bakit hindi mapuputol ang isang restriction enzyme?

Ang paghahanda ng DNA na ma-cleaved dapat maging malaya sa mga kontaminant tulad ng phenol, chloroform, alkohol, EDTA, detergent, o labis na mga asin, na lahat ay maaaring makagambala sa paghihigpit na enzyme aktibidad. Kung mayroong isang inhibitor (kadalasang asin, EDTA o phenol), ang control DNA ay naroroon hindi pinutol pagkatapos ihalo.

Bakit maaaring maging sanhi ng aktibidad ng bituin ang dami ng enzyme?

Ang aktibidad ng bituin ay ang pagpapahinga o pagbabago ng pagtitiyak ng paghihigpit enzyme mediated cleavage ng DNA na pwede mangyari sa ilalim ng mga kondisyon ng reaksyon na malaki ang pagkakaiba sa mga pinakamainam para sa enzyme . Pwedeng star activity nangyayari dahil sa presensya ng Mg2+, bilang ay makikita sa HindIII, halimbawa.

Inirerekumendang: