Paano gumagana ang pag-clone ng Gibson?
Paano gumagana ang pag-clone ng Gibson?

Video: Paano gumagana ang pag-clone ng Gibson?

Video: Paano gumagana ang pag-clone ng Gibson?
Video: Primer Design and Fragment Assembly Using NEBuilder HiFi DNA Assembly or Gibson Assembly 2024, Nobyembre
Anonim

Ang Gibson Cloning Ang Master Mix ay binubuo ng tatlong magkakaibang enzyme sa loob ng isang buffer. Ang bawat enzyme ay may partikular at natatanging function para sa reaksyon: T5 Exonuclease - lumilikha ng single-strand DNA 3' overhangs sa pamamagitan ng pagnguya pabalik mula sa DNA 5' end. Ang mga komplementaryong fragment ng DNA ay maaaring magkadugtong sa isa't isa.

Kung isasaalang-alang ito, paano gumagana ang Gibson?

Ang Gibson Ang Assembly® method ay isang cloning procedure na nagbibigay-daan sa pag-clone ng dalawa o higit pang fragment nang hindi nangangailangan ng restriction enzyme digestion o compatible restriction site. Sa halip, ang mga dulong magkakapatong na tinukoy ng gumagamit ay isinasama sa mga fragment upang payagan ang tuluy-tuloy na pagsasama ng mga katabing fragment.

Katulad nito, ano ang nasa Gibson Assembly Master Mix? Ang Gibson Cloning Master Mix ay binubuo ng tatlong magkakaibang enzyme sa loob ng isang buffer. Ang bawat enzyme ay may partikular at natatanging function para sa reaksyon: T5 Exonuclease - lumilikha ng single-strand DNA 3' overhangs sa pamamagitan ng pagnguya pabalik mula sa DNA 5' end. Ang mga komplementaryong fragment ng DNA ay maaaring magkadugtong sa isa't isa.

Sa ganitong paraan, paano gumagana ang Golden Gate assembly?

Golden Gate pag-clone o Ang pagpupulong ng Golden Gate ay isang molecular cloning method na nagbibigay-daan sa isang researcher na sabay-sabay at direksyong mag-assemble ng maramihang DNA fragment sa isang piraso gamit ang Type IIs restriction enzymes at T4 DNA ligase. Ito pagpupulong ay ginanap sa vitro.

Paano gumagana ang pag-clone ng Gateway?

Ang GATEWAY Cloning Ang teknolohiya ay batay sa site-specific recombination system na ginagamit ng phage l upang isama ang DNA nito sa E. Ang attL at attR na mga site na nakapalibot sa ipinasok na phage DNA ay muling pinagsama ang site-partikular sa panahon ng excision event upang reporma ang attP site sa phage l at ang attB site sa E.

Inirerekumendang: