Talaan ng mga Nilalaman:

Bakit kailangang linisin ang mga produkto ng PCR bago i-sequence?
Bakit kailangang linisin ang mga produkto ng PCR bago i-sequence?

Video: Bakit kailangang linisin ang mga produkto ng PCR bago i-sequence?

Video: Bakit kailangang linisin ang mga produkto ng PCR bago i-sequence?
Video: TIPS BEFORE PA SWAB TEST/.IT WORKED PERFECTLY 2024, Nobyembre
Anonim

Pagpapatunay ng ninanais produkto ay mahalaga , na kinabibilangan ng pagkumpirma ng kakulangan ng hindi partikular mga produkto at mga primer na dimer. Malinis -up ng reaksyon timpla ay din kailangan upang alisin ang mga hindi pinagsamang panimulang aklat at dNTP na maaaring makagambala sa mga kasunod na reaksyon at humantong sa hindi nababasang pagkakasunud-sunod.

At saka, bakit kailangang linisin ang mga produkto ng PCR?

Kailangan mong linisin ang mga produktong PCR upang mapupuksa ang hindi nagamit na mga primer, nucleotides, at mga enzyme upang ma-optimize ang tagumpay ng ligation, na magpapanatili at mag-sequence ng produkto ng PCR . Upang maglinis ang Mga produkto ng PCR , ginagamit ang size exclusion chromatography.

Maaari ring magtanong, dapat mo bang linisin ang mga produkto ng PCR bago i-restriction ang endonuclease digestion? Ang karamihan ng paghihigpit Ang mga enzyme ay aktibo sa PCR mga buffer. Para sa mga aplikasyon sa pag-clone, paglilinis ng Mga produkto ng PCR bago ang panunaw ay kailangan upang alisin ang aktibong thermophilic DNA polymerase na nasa PCR halo. Maaaring baguhin ng DNA polymerases ang mga dulo ng cleaved DNA at bawasan ang yield ng ligation.

Nagtatanong din ang mga tao, paano mo inihahanda ang PCR products para sa sequencing?

Direktang Pagkakasunud-sunod ng Mga Produkto ng PCR

  1. Tiyaking pinalaki mo ang tamang fragment.
  2. Dapat mong tanggalin ang lahat ng natitirang PCR primer at unincorporated nucleotides.
  3. Kung ang mga PCR primer ay magiging (mga) sequencing primer din, tiyaking tumutugma ang mga ito sa aming mga kundisyon.
  4. Huwag mag-overconcentrate sa sample!

Maaari mo bang i-sequence ang produkto ng PCR?

Direkta Pagsusunod-sunod ng Mga Produkto ng PCR . Pagsusunod-sunod ginagamit lamang isa panimulang aklat sa halip na ang dalawang ginamit sa PCR . Kung gagawin mo huwag tanggalin ang parehong panimulang aklat, gagawin mo kumuha ng dalawa mga pagkakasunod-sunod nakapatong sa isa't isa na hindi nababasa. OK lang gumamit ng a PCR panimulang aklat para sa pagkakasunud-sunod basta't tumutugma ito sa ating mga kondisyon.

Inirerekumendang: