Kapag gumaganap ng isang asul na puting screen na naglalaman ng puting bacterial colonies?
Kapag gumaganap ng isang asul na puting screen na naglalaman ng puting bacterial colonies?
Anonim

Sa kabaligtaran, ang puting kolonya hindi maaaring gawing metabolismo ang X-Gal upang makabuo ng bughaw Kulay, sapagkat hindi sila gumagawa ng pagganap na β-galactosidase pagkatapos kumuha ng plasmid na nagdadala ng ipinasok na DNA at nakakagambala sa lacZ α gene. Ang mga ito naglalaman ng mga puting kolonya ang recombinant bakterya at dapat mapili (Larawan 1).

Sa ganitong paraan, ang lahat ba ng mga puti at asul na mga kolonya ay naglalaman ng isang plasmid?

Ang naglalaman ang mga asul na kolonya "sarili" na pinagkatiwalaan mga plasmid na gawin walang pagsingit ng DNA na nakakagambala sa lac Z gene. Mga puting kolonya binubuo ng bacteria na nagdadala mga plasmid na may mga insert na fragment ng DNA na nakakagambala sa lac Z gene. Ang pagpili ay gagawin sa ampicillin naglalaman ng daluyan.

Gayundin, ano ang layunin ng asul na puting screening? Ang bughaw – maputi ang screen ay isang screening pamamaraan na nagbibigay-daan para sa mabilis at maginhawang pagtuklas ng mga recombinant na bakterya sa mga eksperimento sa molecular cloning na nakabatay sa vector. Ang DNA ng interes ay pinagsama sa isang vector.

Isinasaalang-alang ito, ano ang asul na puting colony screening?

Ang bughaw - puting screen ay isang screening pamamaraan na nagbibigay-daan para sa pagtuklas ng mga matagumpay na ligations sa pag-clone ng gene na nakabatay sa vector. Ang DNA ng interes ay pinagsama sa isang vector. Kung ang ligation ay matagumpay, ang bakterya kolonya magiging maputi ; kung hindi, ang kolonya magiging bughaw.

Bakit ang ilang mga kolonya ay asul at ang iba ay puti?

Kahit ano kolonya na naglalaman ng plasmid (at samakatuwid ang gumaganang β-galactosidase gene) ay liliko bughaw , isang resulta ng aktibidad na β-galactosidase. Ito ay tinatawag na α-komplementaryong. Ang insert ay nagambala sa β-galactosidase gene, at samakatuwid ang mga ito mga kolonya manatili maputi.

Inirerekumendang: