Paano ginagamit ang mga restriction enzymes kapag nagsasagawa ng gel electrophoresis?
Paano ginagamit ang mga restriction enzymes kapag nagsasagawa ng gel electrophoresis?

Video: Paano ginagamit ang mga restriction enzymes kapag nagsasagawa ng gel electrophoresis?

Video: Paano ginagamit ang mga restriction enzymes kapag nagsasagawa ng gel electrophoresis?
Video: Making an Agarose Gel - University of Leicester 2024, Nobyembre
Anonim

1 Sagot. Upang putulin ang DNA, RNA, o plasmid sa paghihigpit mga site (tulad ng EcoRI, BamHI, hindIII at BglII) upang lumikha ng mas maliliit na genetic fragment na maaaring paghiwalayin at sa gayon ay mailalarawan gamit ang gel electrophoresis.

Katulad din ang maaaring itanong ng isa, alin ang papel ng mga restriction enzymes?

A paghihigpit na enzyme ay isang protina na kumikilala ng isang tiyak, maikling nucleotide sequence at pinuputol ang DNA sa mismong lugar na iyon, na kilala bilang paghihigpit site o target na pagkakasunud-sunod. Sa buhay na bakterya, restriction enzymes function upang ipagtanggol ang cell laban sa invading viral bacteriophage.

Gayundin, paano mo malalaman kung aling restriction enzyme ang gagamitin? Kapag pumipili ng mga enzyme ng paghihigpit, gusto mong pumili ng mga enzyme na:

  1. I-frank ang iyong insert, ngunit huwag gupitin sa loob ng iyong insert.
  2. Nasa gustong lokasyon sa iyong tatanggap na plasmid (karaniwan ay nasa Multiple Cloning Site (MCS)), ngunit huwag mag-cut sa ibang lugar sa plasmid.

Bukod dito, paano ginagamit ang mga restriction enzymes sa pananaliksik?

Sa laboratoryo, mga enzyme ng paghihigpit (o restriction endonucleases ) ay ginamit upang i-cut ang DNA sa mas maliliit na fragment. Ang mga pagbawas ay palaging ginagawa sa mga tiyak na pagkakasunud-sunod ng nucleotide. magkaiba mga enzyme ng paghihigpit kilalanin at gupitin ang iba't ibang sequence ng DNA.

Ano ang papel ng gel electrophoresis?

Gel electrophoresis ay isang pamamaraan na ginagamit upang paghiwalayin ang mga fragment ng DNA ayon sa kanilang laki. Ang mga sample ng DNA ay inilalagay sa mga balon (indentations) sa isang dulo ng a gel , at isang electric current ay inilapat upang hilahin ang mga ito sa pamamagitan ng gel . Ang mga fragment ng DNA ay negatibong sisingilin, kaya lumipat sila patungo sa positibong elektrod.

Inirerekumendang: